همسانه سازی ژن sox۲ انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول های hek۲۹۳t

چکید ه   سابقه و هدف   ژن sox2 در میان گونه ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول های پیش ساز از سلول های تمایز یافته می باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول های پیش ساز می شود. sox2 ، oct4 ، cmyc و klf4 سبب باز برنامه نویسی سلول های سوماتیک به سلول های بنیادی می شوند. امروزه از ژن sox2 در جهت تولید سلول­های ips و سلول درمانی استفاده می شود. در این تحقیق همسانه سازی ژن sox2 در ناقل لنتی ویروس و آلوده سازی سلول های hek293t بررسی شد.     مواد و روش ها   در یک مطالعه تجربی، توالی کدکننده ژن sox2 سنتز و در ناقل همسانه سازی puc57 دریافت گردید. ژن ساختـه شده در ناقل بیانی لنتی ویروس plex-mcs ساب ـ کلون شد. سازه نوترکیب توسط روش های pcr ، هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. ذرات لنتی ویروس در سلول های تولید کننده hek293t تولید شدند. از وکتور لنتی ویروسی حاوی ژن gfp به عنوان کنترل استفاده شد. سلول های hek293t توسط ذرات ویروسی آلوده شده و به وسیله مقاومت به آنتی بیوتیک پورومایسین انتخاب گردیدند. بیان sox2 در سلول های hek293t توسط rt-pcr بررسی شد.   یافته ها   سازه نوترکیب بیان کننده sox2 ساخته و تایید گردید. سلول های hek293t توسط ذرات ویروس آلوده شدند و پس از 24 ساعت، بیش از 90% سلول های hek293t بیان gfp را از خود نشان دادند. با استفاده از روش rt-pcr بیان sox2 در سلول های hek293t تایید شد.   نتیجه گیری   سلول های hek293t با موفقیت سازه های نوترکیب را دریافت و ژن های gfp و sox2 را بیان نمودند.